针灸戒毒的实验研究

欧桂珍 杨涛 崔瑾 王兴桂 于浩

贵阳中医学院针灸系

邹阳

贵州省临床检验中心 （550002）

关键词：针灸 吗啡成瘾大鼠 东莨菪碱 纳络酮 淋巴细胞增殖能力

我们曾作了关于针灸戒毒的临床研究工作，取得了很好的临床疗效。为了探讨其机理，我们又进一步作了针灸戒毒的实验研究，通过针灸、东莨菪碱等对吗啡成瘾大鼠模型的治疗，并对其淋巴细胞的增殖情况作了初步测定，得出了针灸戒毒的初步机理。为戒毒的多种疗法的进一步完善作了有益的探索。

自七十年代开展针灸戒毒以来，因其本身具有简便、易行、经济、痛苦小、损伤小、副作用小、可抑制戒断综合症状、易为患者所接受等优点，很快在世界各国推广，为进一步研究其戒毒的机理，我们运用大鼠吗啡成瘾模型进行研究，现报道如下：

一、材料：

动物：Wister大鼠雌雄各半（贵阳医学院动物中心提供），体重150±20g。

药品及试剂：吗啡（沈阳第一制药厂产品批号950404），东莨菪碱（上海禾丰制药有限公司产品，批号951001），盐酸纳络酮注射液（北京四环制药厂产品，批号960426），RPMI-1640干粉（serva美国），PHA（上海生化试剂公司产品，批号960502）。MTT（F1uka瑞士）由贵阳中医学院微生物教研室主任石玉城副教授惠赠。

器材：华佗牌0.3cm银针及艾绒（苏州针灸用品厂产品），G6805-Ⅲ型多用电针治疗仪（苏州医疗器械厂产品），DG3021型酶免疫检测仪（南京无线电厂产品）。

二、吗啡处理：

大鼠吗啡成瘾急性成瘾模型的建立：大鼠置鼠笼适应4天后，开始注射吗啡。首天皮下注射吗啡剂量20mg/kg。每天分2次注射，逐天吗啡剂量增加20mg/kg，连续注射5天，末次注射吗啡剂量为50mg/kg。

三、治疗方法：

成瘾大鼠的治疗，随机分为针灸治疗组、东莨菪碱治疗组（简称药物组）、自身脱瘾组（简称病损组）。针灸治疗组于成瘾模型建立后16h开始治疗，取穴：足三里、内关、三阴交、百会、合谷。穴位定位参见文献。每日上午8时，取穴：足三里、内关、三阴交、合谷。用0.3cm长银针刺入，然后任选两穴用G6805-Ⅲ型电针给予频率为10OHZ的频率、连续波、强度以大鼠后肢轻度抖动的所需值为度。电针刺激25分钟，每日上午一次，连续10天。每日下午4时开始，用艾灸百会穴治疗：隔姜灸，将鲜姜片切成0.1cm厚，上穿数孔，用艾绒制成0.5×0.5cm的圆锥型艾柱，在大鼠百会穴上涂一层凡士林后，上置姜片，把艾柱放在姜片上点燃，施灸，每次2壮，连续治疗10天。东莨若碱治疗组末次注射吗啡后16h腹腔内注射东莨菪碱0.3mg/kg，每日2次，连续注射10天。自身脱瘾组每天腹腔内注射同量生理盐水，连续注射10天。

四、纳络酮催瘾方法：

最后一次吗啡注射后3h及最后一次治疗后2h，均腹腔注射4mg/kg纳络酮。观察戒断症状1h，进行评分。观察指标及结果见表一，12h后断头处死取脾。

五、脾细胞悬液的制备：参见文献：

六、培养液及各种试剂：

参见文献。

平衡溶液（BSS）、Tris-NH4CI缓冲液、0.2%、伊红Y，0.04N盐酸异丙醇等溶液见相关文献。

七、有丝分裂原诱导的大鼠淋巴细胞增殖反应：在40孔培养板内入5×106/ml的脾细胞悬液100μl/孔，再加入RPMI-1640完全培养液10μl/孔，另一孔不加PHA，均作复孔，培养板置湿盒中，普通孵箱37℃静置密闭培养48小时，用MTT比色测定细胞增殖情况。

MTT比色分析法测定细胞增殖：脾细胞经48h培养后，轻轻取弃上清培养液100 μl/孔加入0.5%MTT10μl，置湿盒37℃4-6h后，加入酸化异丙醇100μl /孔，混匀，静置几分钟用D3021型酶免疫检测仪（λ=570nm）测各孔的OD值，以所测OD值反映淋巴细胞增殖情况，同时计算增殖指数加以比较，样本的增殖指数（GI）=加有丝分裂原孔的OD值/不加有丝分裂原孔的OD均值。

结果与分析

一、有关针灸治疗前后大鼠戒断症状反应表。

我们以积分的高低来判定治疗的优劣，积分在2分以下为治愈，在2-5分之间为好转，在5-9分之间为无效。从表一得出以下结论：

1.针灸组经10天治疗后，大鼠治愈，与正常组无显著差异性（P〉0.05）。

2.针灸组与病损组（P〈0.01），东莨菪碱组（P〈0.05）在戒断症状恢复上有非常显著的差异性。说明针灸疗法优于其它两种疗法。

3.病损组（P〈0.05）、东莨菪组（P〈0.01）与造模组相比均不同程度地改善症状，且具有统计学意义，说明自身脱瘾疗法（“冷火鸡”疗法）和药物组对吗啡成瘾大鼠的治疗均有好转。

4.病损组与药物组在改善大鼠戒断症状上无显著差异性（P〉0.05）。

二、有关吗啡成瘾大鼠淋巴细胞的增殖能力。

从表二、表三的实验数据得出以下结论：

1.造模后正常组与病损组之间淋巴细胞增殖能力呈非常显著的差异性（P〈0.01）。治疗后，正常组与病损组之间淋巴细胞增殖能力有非常显著的差异性（P〈0.01），说明吗啡成瘾大鼠的免疫功能受到严重的损害。

2.针灸组较正常对照组淋巴细胞增殖能力略低，但二者之间无显著差异性（P〉0.05）。针灸组较病损组（P＜0.01）及东莨菪碱组（P＞0.05）对淋巴细胞的增殖能力均有非常显著及显著差异性。说明针灸疗法对吗啡成瘾大鼠淋巴细胞增殖能力有明显的改善和恢复作用，能恢复爱受损的免疫功能，而药物组及自身脱瘾组则无此作用。

讨 论

阿片类药物依赖是一种细胞适应反应。众所周知，各种类型的敏感细胞都有能力去适应急性的或慢性的过渡刺激或过低刺激，产生适应性的敏感性变化。长期应用阿片类药物，其中枢抑制作用导致机体发生适应性高敏感，在维持用药的状况下，这种适应性高敏感处于潜伏状态，一旦断药，它就以反跳性高兴奋性的形式表达出来，即戒断症状。

本实验通过淋巴细胞增殖能力的强弱，反映免疫功能的状态，在本实验条件下，实质反映了T细胞的增殖能力。吗啡成瘾大鼠T细胞介导的细胞免疫功能受到严重损害，这与国外报道一致，在生理条件下，神经内分泌激素对T细胞系统呈现明显的调控作用，β-内啡肽和脑啡肽可通过其羟基末端特异性受体的介导，促使T细胞分裂原反应和E玫瑰花结形成（1个β-内啡肽分子可同时使两 个处在不同功能状态的淋巴细胞“桥联”）。

长期滥用外源性阿片样物质可引起体内阿片肽系统退行性改变，使其对T细胞及其亚群的正常调节作用减退和消失，导致细胞免疫功能受损。实验研究发现，腺苷酸环化酶在药物依赖和耐受性的发生中起着重要作用。由PGE1，PGE2所引起大鼠脑匀浆中环-磷酸腺苷（cAMP）的形成被吗啡、海洛因抑制，这种抑制作用与药物浓度呈比例，在体内能达到抑制浓度，纳张络酮对此有对抗作用。受到抑制的PGE-cAMP机制的代偿性加大可能造成耐受性及依赖性。长期注射吗啡使血浆ACTH和TSH显著降低。

针灸对机体的作用是双向的良性调节作用，而吗啡成瘾大鼠模型中大鼠体内的内源性阿片样物质（β-内啡肽、脑啡肽、强啡肽）分泌减少，在电针使用高频100HZ以上刺激时，上述三类阿片肽的分泌增加，其作用不被纳络酮所阻断。β-内啡肽能促进淋巴细胞的增殖。脑啡肽可促进淋巴细胞的转化。强啡肽可以抑制吗啡戒断症状，而并无严重的副作用。针灸促进ACTH分泌，使受损的吗啡成瘾大鼠的下丘脑—垂体—肾上腺皮质功能轴的活动增加，而ACTH能与细胞膜表面的β受体结合，使 cAMP含量增加，从而解除了受体抑制的PGE-cAMP的依赖性。针灸戒毒的机理除上述外，可能与针灸调节交感—肾上腺髓质系统、下丘脑—重体—甲状腺轴、下丘脑—重体—性腺轴、去甲肾上腺素—血小板-5-HT-淋巴细胞轴有关，其深入的机理，尚待进一步研究。